Selfmade In Vitro

sollte gut schließen und darf beim Reinigen nicht vergessen werden. Die sauberen Gläser werden jetzt mit einem Stück Küchenrolle trockengerieben und verschlossen bis zu deren Einsatz aufbewahrt. Da das Trockenreiben von Reagenzgläser (speziell die Innenseite) eher mühselig ist spülen ich meine Reagenzgläser nach dem Waschen mit destilliertem Wasser aus, trocknen nur die Aussenseite ab und lassen sie an der Luft trocknen. So vermeide ich lästige Kalkflecken in den Reagenzgläser und ersparen uns das Trockenreiben der Innenseite.

WICHTIG: Da die Gläser bei Sterilisieren im Backrohr ca. 150 Grad aushalten müssen, sind sie auf deren Tauglichkeit zu überprüfen. Die Gläser dürfen keinen Kunststoffdeckel haben.

Ansetzen des Nährbodens (Medium)

1. Die notwendige Menge an Dünger/Wurzelhormon für den Nährboden (siehe Beipackzettel oder Aufdruck auf der Flasche) mit Hilfe einer Briefwaage abwiegen.
2. Da im Medium kein Geliermittel enthalten ist, muss man noch Agar-Agar Pulver vorbereiten. Ich verwende für meine Nährböden 6 – 7 Gramm Agar-Agar pro Liter Nährmedium.
3. Das Backrohr einschalten und auf 150 Grad vorheizen.
4. Etwa 2/3 der gewünschte Menge destillierte Wasser in das Becherglas füllen und den Dünger einrühren.
5. Solange destilliertes Wasser zugeben bis die endgültige Menge erreicht ist und danach noch einmal gut umrühren.
6. Den pH-Wert mit Hilfe von Teststreifen oder pH-Meter feststellen. Der pH-Wert sollte je nach Pflanze angepasst werden. Ist der Wert zu niedrig, dann kann man durch vorsichtiges Hinzugeben von NaOH den pH-Wert erhöhen. Ist der pH-Wert zu hoch, dann kann man diesen durch vorsichtiges Hinzugeben von HCl senken.
7. Jetzt kann man das Becherglas auf den Herd stellen und das Medium erhitzen.
8. Sobald die ersten Dampfblasen vom Boden des Becherglases aufsteigen kann man mit dem Einrühren des Agar-Agar Pulver beginnen.
9. Das Medium ca. 2 Minuten leicht kochen lassen wobei man aber darauf achten muss, dass das Medium nicht aufschäumt.
10. Den flüssigen Nährboden in die Kulturgefässe füllen und darauf achten, dass das Nährmedium nicht auf den Hals der Kulturgefässe kommt weil sonst Kontaminationen (Pilze, …) sehr leicht in das Gefäss kommen können. Bei sehr engen Gefässen (z.B. Reagenzgläser, Flaschen, …) ist ein Glastrichter sehr zu empfehlen.

11. Den Deckel der Kulturgefässe auf die befüllten Gläser legen, aber nicht festschrauben weil im Backrohr durch die Hitze ein Überdruck im Kulturglas entsteht der das Glas beschädigen könnte wenn dieses fest verschlossen ist. Hat das Gefäss (z.B. Reagenzgläser, Flasche) keinen hitzebeständigen Schraubverschluss, dann muss man in die Öffnung einen Wattpfropfen stecken.

12. Im nächsten Schritt werden die Gefässe mit Alufolie abgedeckt und ins vorgeheizte Backrohr gestellt. Bei Reagenzgläser ist es empfehlenswert diese in ein Drahtgestell zu stellen und dieses mit Alufolie zu umwickeln damit die einzelnen Alufolienkappen nicht abgehoben werden (beim Erhitzen entweicht Luft die die Folie sonst wegschiebt).

13. Das Backrohr nach 30 Minuten abschalten und die Gläser bei geschlossener Ofentüre langsam abkühlen lassen. Ich setze meine Nährböden immer nach dem Abends an, dann wird der Herd nicht mehr benötigt und die Gläser können in Ruhe über Nacht abkühlen.

14. Ist das Backrohr ganz ausgekühlt, dann kann man die Gläser aus dem Ofen holen und an einem hellen Ort abstellen. Vorsicht bei Angreifen der Gläser damit man die Alufolie nicht unnötig bewegt (Kontaminationsgefahr). Man sollte die frischen Nährböden vor dem Gebrauch zumindest 5 Tage (besser eine Woche) stehen lassen weil in dieser Zeitspanne eventuelle Kontaminationen ausreichend Zeit haben zu wachsen. Sind die Gläser nach 5 Tagen immer noch steril, dann kann man ziemlich sicher davon ausgehen, dass die Nährböden für den weiteren Gebrauch (Aussaat, Umlegen, …) brauchbar sind.

Herstellen von sterilen destillierten Wasser

Um steriles destilliertes Wasser zum Spülen der Samen zu bekommen, füllt man einfach etwas Wasser in ein verschraubbares Glas, legt den Deckel lose auf das Glas und deckt den Deckel mit Alufolie ab. Das Glas kann dann gemeinsam mit den Nährböden 30 Minuten lang im Backrohr sterilisiert werden.

Punkt 2: Das Einsetzen von Pflanzenteilen

Küchentisch ab. Während die eine Hand das Glas im Dampfstrom hält nimmt man mit der anderen Hand die Pinzette, flammt diese ab und entnimmt damit eine Pflanze. Die Pflanze wird auf dem ethanolgetränkten Wattepad im Dampfstrom abgelegt, das Glas kann man am Küchentisch abstellen. Jetzt schwenkt man die Pinzette kurz im kochenden Wasser und stellt sie zurück in den Ethanol.

2. Jetzt nimmt man eine Reagenzgläser mit Nährmedium und entfernt im Dampfstrom die Alufolienkappe. Die Kappe legt man neben dem Kochtopf auf dem ethanolgetränkten Küchentuch ab.

3. Als nächstes flammt man die Pinzette ab und entfernt damit den Wattepfropfen den man am Gitterrost ablegt.

4. Ist das erledigt, flammt man die Impföse ab. Dann nimmt eine Pflanze auf um sie auf direkten Weg in ein Reagenzglas zubringen und dort auf den Nährboden zu setzen. Danach schwenkt man die Impföse kurz im kochenden Wasser und stellt sie zurück im Ethanol.

5. Jetzt steckt man den Wattepfropfen in die Reagenzgläser. Die Pinzette wird danach kurz im kochenden Wasser geschwenkt und zurück in den Ethanol gestellt.

6. Als nächstes nimmt man die Reagenzgläser und flammt das Ende des Wattepfropfens kurz ab (die Reagenzgläser dabei einmal um die eigene Achse drehen).

7. Ist das erledigt, nimmt man die Alufolienkappe und schiebt diese über den Wattepfropfen. Um die Folienkappe vor Verrutschen zu sicher versehen wir jede Reagenzgläser mit einem Gummiring der die Alufolie an die Reagenzglaswand drückt.

2. Als nächstes nimmt man eine frisches Kulturglas in das die Setzlinge überimpft werden sollen und entfernt im Dampfstrom die Alufolie.

3. Nachdem man die Alufolie entfernt hat nimmt man den Deckel des Glases ab und legt ihn mit der Öffnung nach unten auf den Gitterrost. Das Glas wird ebenfalls auf den Rost abgelegt.

4. Nun flammt man die Impföse ab, kühlt die Spitze kurz im Medium auf dem die Setzlinge liegen ab und entnimmt diese. Bei Abkühlen der Impföse sollte man ein Stück Nährboden wählen auf dem nicht viele Pflanzen liegen. Die entnommen Setzlinge werden auf kürzestem Weg in das neue Glas gebracht und dort auf dem Nährboden verteilt. Es ist besser nicht zu viele Setzlinge zu überimpfen weil sich diese meist noch teilen.

5. Jetzt schwenkt man die Impföse kurz im kochenden Wasser und stellt sie zurück in den 70%igen Ethanol. Das frischbeimpfte Glas wird mit seinem Deckel verschlossen und neben dem Kochtopf auf der Arbeitsfläche abgestellt.